期刊简介
本刊重点刊登国内外有关蛇类科学与生物毒素的开发与利用，医学基础、临床的研究与实践，微循环研究，亚健康防治，健康养生等生命科学最新科技信息，并用一定版面介绍蛇类养殖与利用，供求信息等内容。
首页>蛇志杂志
- 杂志名称：蛇志杂志
- 主管单位：广西区科学技术协会
- 主办单位：中国蛇协
- 国际刊号：1001-5639
- 国内刊号：45-1168/R
- 出版周期：季刊
期刊荣誉：2000年荣获执行《CAJ-CD规范》优秀奖期刊收录：知网收录(中), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 上海图书馆馆藏
定点突变巴曲酶在毕赤酵母中的克隆与表达
王宏英；徐梅；兰海英；杨宇；张宏杰；李娜；薛雁；薛百忠
关键词：突变巴曲酶, 类凝血酶, 巴斯德毕赤酵母, 克隆和表达, 偏好密码子, 套叠PCR
摘要：目的 为避免毕赤酵母分泌的Kex2蛋白酶对发酵液中所表达的巴曲酶的降解.利用重叠PCR方法对巴曲酶基因进行定点突变,将巴曲酶基因第45位的Arg突变为Lys.方法 将突变后的基因克隆到酵母分泌型表达载体pPICZαA中,将重组载体酶切线性化后经电转化转入巴斯德毕赤酵母细胞,筛选鉴定转化子,经摇瓶发酵甲醇诱导,酵母菌分泌表达有凝血活性的定点突变巴曲酶,经SDS-PAG电泳、免疫印迹确定其分子量为32 kD.结果发酵罐的表达量达到52 KU/ml发酵液,较重组天然巴曲酶的表达量提高了73.3%.结论 定点突变巴曲酶的表达量比重组天然巴曲酶的表达量有显著提高,表达的突变巴曲酶同样具有凝血活性.
友情链接